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Microscopic observation of bacteria

Streptococcus thermophilus observed by oil immersive microscope (X1000) Streptococcus thermophilus observed by oil immersive microscope (X1000)
Lactobacillus sp. observed by oil immersive microscope (X1000) Lactobacillus sp. observed by oil immersive microscope (X1000)
File RealAudio document Gram staining
The Gram staining comes from Hans Christian Gram in 1884. This colouration is used to highlight the bacterial wall and its properties, and to use these properties to analyse and classify these bacteria. Therefore, the scientists can distinguish bacteria with Gram positive or negative staining. The ones with Gram+ have a simple wall and a great quantity of peptidoglycans, while the Gram - bacteria have a lower quantity of peptidoglycans but a supplementary membrane. from Wikipedia, http://fr.wikipedia.org/wiki/Coloration_de_Gram
File Protocol of coloration
- Réalisation du frottis Elle nécessite d'avoir un frottis fixé, la solution la plus simple est avec de l'éthanol durant 5 minutes (et rincer à l'eau), - Réalisation de la coloration 1.Coloration par le violet de gentiane. Laisser agir de 30 secondes à 1 minute. Rincer à l'eau déminéralisée. 2.Mordançage (fixation à l'aide d'un sel) au lugol (solution d'iode iodo-iodurée): étaler le lugol et laisser agir 20 secondes ; Rincer à l'eau déminéralisée. On peut réaliser une deuxième fois l'opération identiquement pour plus de sécurité. 3.Décoloration (rapide) à l'alcool (+acétone): verser goutte à goutte l'alcool ou un mélange alcool-acétone sur la lame inclinée obliquement, et surveiller la décoloration (5 à 10 secondes). Le filet doit être clair à la fin de la décoloration. Rincer sous un filet d'eau déminéralisée ; 4.Recoloration à la fuchsine. Laisser agir de 30 secondes à 1 minute. Laver doucement à l'eau déminéralisée. Sécher la lame sur une platine chauffante à 40°C, 10 à 15 minutes. 5.Observer avec une goutte d'huile à immersion objectif 100 (grossissement ×1000). L'étape 3 (alcool) sert à décolorer le cytoplasme des bactéries qui seront dites « Gram négatives ». En effet, celles-ci ont une paroi pauvre en peptidoglycanes - donc plus fine - qui va laisser passer l'alcool (molécule hydrophile) ou le mélange alcool-acétone, et qui décolorera le cytoplasme en éliminant le violet de gentiane. La recoloration à la fuchsine permet de les colorer en rose. Au contraire, pour les bactéries dites « Gram positif » la paroi constitue une barrière imperméable à l'alcool car elle est composée d'une « couche » de peptidoglycanes plus importante donc de ce fait ; plus épaisse. Elles resteront alors violettes.
File RealAudio document Composition of bacterial cell wall (Gram + and Gram -)

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