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Observation microscopique de bactéries

Streptococcus thermophilus observée au microscope à immersion (X1000) Streptococcus thermophilus observée au microscope à immersion (X1000)
Lactobacillus sp. observée au microscope à immersion (X1000) Lactobacillus sp. observée au microscope à immersion (X1000)
Fichier RealAudio document coloration de Gram
La coloration de Gram doit son nom au bactériologiste danois Hans Christian Gram qui mit au point le protocole en 1884. C'est une coloration qui permet de mettre en évidence les propriétés de la paroi bactérienne, et d'utiliser ces propriétés pour les distinguer et les classifier. Ainsi, les scientifiques peuvent distinguer les bactéries à Gram positif, dotées d'une simple paroi avec une grande quantité de peptidoglycanes, des bactéries à Gram négatif, composées de moins de peptidoglycanes mais pourvues d'une membrane externe supplémentaire. Les bactéries dites « Gram positif » dont la paroi est composée d'une « couche » de peptidoglycanes plus épaisse, apparaîtront violettes alors que les bactéries "Gram -" seront roses (car recolorées à la fuchsine suite à la décoloration). d'après Wikipedia, http://fr.wikipedia.org/wiki/Coloration_de_Gram
Fichier protocole de coloration
- Réalisation du frottis Elle nécessite d'avoir un frottis fixé, la solution la plus simple est avec de l'éthanol durant 5 minutes (et rincer à l'eau), - Réalisation de la coloration 1.Coloration par le violet de gentiane. Laisser agir de 30 secondes à 1 minute. Rincer à l'eau déminéralisée. 2.Mordançage (fixation à l'aide d'un sel) au lugol (solution d'iode iodo-iodurée): étaler le lugol et laisser agir 20 secondes ; Rincer à l'eau déminéralisée. On peut réaliser une deuxième fois l'opération identiquement pour plus de sécurité. 3.Décoloration (rapide) à l'alcool (+acétone): verser goutte à goutte l'alcool ou un mélange alcool-acétone sur la lame inclinée obliquement, et surveiller la décoloration (5 à 10 secondes). Le filet doit être clair à la fin de la décoloration. Rincer sous un filet d'eau déminéralisée ; 4.Recoloration à la fuchsine. Laisser agir de 30 secondes à 1 minute. Laver doucement à l'eau déminéralisée. Sécher la lame sur une platine chauffante à 40°C, 10 à 15 minutes. 5.Observer avec une goutte d'huile à immersion objectif 100 (grossissement ×1000). L'étape 3 (alcool) sert à décolorer le cytoplasme des bactéries qui seront dites « Gram négatives ». En effet, celles-ci ont une paroi pauvre en peptidoglycanes - donc plus fine - qui va laisser passer l'alcool (molécule hydrophile) ou le mélange alcool-acétone, et qui décolorera le cytoplasme en éliminant le violet de gentiane. La recoloration à la fuchsine permet de les colorer en rose. Au contraire, pour les bactéries dites « Gram positif » la paroi constitue une barrière imperméable à l'alcool car elle est composée d'une « couche » de peptidoglycanes plus importante donc de ce fait ; plus épaisse. Elles resteront alors violettes.
Fichier RealAudio document Composition de la paroi des bactéries (Gram + and Gram -)

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